Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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SDHA Double Nickase Plasmid (m): sc-426283-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das SDHA Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- SDHA Double-Nickase-Plasmid (m) und SDHA Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Sdha abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: SDHA: sc-390381
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
SDHA Double Nickase Plasmid (m) | sc-426283-NIC | 20 µg | $410.00 |
Das murine Gen **Sdha** kodiert die Flavoprotein-Untereinheit der Succinatdehydrogenase (SDHA), eine zentrale Komponente des mitochondrialen Komplexes II, die den Tricarbonsäurezyklus mit der Elektronentransportkette verknüpft, indem sie die Oxidation von Succinat zu Fumarat katalysiert und Elektronen auf Ubichinon überträgt. Durch diese Doppelfunktion trägt SDHA zur Regulation der oxidativen Phosphorylierung, des mitochondrialen Redoxgleichgewichts und der zellulären Bioenergetik bei, mit nachgelagerten Effekten auf reaktive Sauerstoffspezies und metabolitengesteuerte Signalwege. Eine Störung der Komplex-II-Funktion wird häufig im Zusammenhang mit metabolischer Umprogrammierung, hypoxieassoziierter Signalgebung und mitochondrialen Stressantworten untersucht. Eine veränderte SDHA-Aktivität ist zudem relevant für Modelle der Neurodegeneration und der Tumorbiologie, in denen mitochondriale Dysfunktion und onkometabolitähnliche metabolische Verschiebungen untersucht werden.
SDHA Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Sdha-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Sdha abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Sdha-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Sdha-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.