PYGL CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-430989
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- PYGL Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im PYGL-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: PYGL: sc-517597
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
PYGL CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) | sc-430989 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
Das murine Pygl-Gen kodiert die hepatische Glykogenphosphorylase (PYGL), ein geschwindigkeitsbestimmendes Enzym, das Glykogen mobilisiert, indem es durch phosphorolytische Spaltung Glucose-1-phosphat erzeugt, das anschließend der Glykolyse und der Aufrechterhaltung der Glukosehomöostase dient. Die PYGL-Aktivität koordiniert die hepatische Glykogenolyse mit hormonellen sowie nährstoffsensorischen Signalen und verknüpft damit die Verfügbarkeit von Kohlenhydraten mit dem Stofffluss durch zentrale Kohlenstoffwechselwege. Eine Störung der PYGL-Funktion verändert Glykogenspeicherung und -nutzung und ist im Kontext angeborener Störungen des Glykogenstoffwechsels relevant, wodurch PYGL ein nützliches Ziel für Untersuchungen zur metabolischen Anpassung und Energiebilanz in Hepatozyten und Ganztierversuchen darstellt. Pygl ist daher für die Forschung zur hepatischen metabolischen Programmierung, zu Fastenantworten und zur systemischen Regulation des Glukosestoffwechsels breit informativ.
Das PYGL CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Pygl-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Pygl-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Pygl nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die PYGL-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Pygl-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der PYGL-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf Pygl-Exone abzielen, die für die PYGL-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere Pygl-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom PYGL CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom PYGL CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Pygl-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das PYGL HDR-Plasmid (m) und PYGL HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Pygl-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Pygl-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.