PTEN Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400103-ACT

PTEN codifica uma fosfatase de lipídios e proteínas que antagoniza a sinalização de PI3K ao desfosforilar PIP3, restringindo assim a ativação de AKT e os programas de crescimento a jusante dependentes de mTOR. Por meio dessa atividade, PTEN regula a progressão do ciclo celular, o metabolismo, a sobrevivência e a migração, além de contribuir para a manutenção da estabilidade genômica e da homeostase tecidual. A função de PTEN integra-se a vias que controlam a polaridade epitelial e a dinâmica do citoesqueleto, influenciando a adesão e o comportamento invasivo. A desregulação da expressão ou atividade de PTEN é frequentemente associada à sinalização oncogênica e a processos imunes e de desenvolvimento alterados, tornando-o um nó amplamente utilizado em estudos mecanísticos de reconfiguração de vias.

PTEN O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PTEN sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PTEN O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PTEN em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PTEN, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PTEN. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PTEN nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PTEN no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PTEN em células tumorais com expressão de PTEN silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.