Plasmide CRISPR/Cas9 KO PP1γ (h): sc-401476

Présentation

PPP1CC code la protéine phosphatase 1 gamma (PP1γ), une phosphatase catalytique sérine/thréonine qui s’associe à diverses sous-unités régulatrices afin de déphosphoryler des substrats clés et de contrôler la spécificité ainsi que la localisation de ses substrats. PP1γ contribue à d’importants réseaux de signalisation et de contrôle du cycle cellulaire en régulant des états de phosphorylation impliqués dans la progression mitotique, la ségrégation des chromosomes et la dynamique du cytosquelette ; elle est également impliquée dans le traitement de l’ARN et les réponses au stress cellulaire. Par ces fonctions, PP1γ influence des voies qui gouvernent la prolifération, la différenciation et la stabilité du génome, faisant de PPP1CC un nœud pertinent pour l’étude des circuits de régulation pilotés par la phosphorylation. Une activité de PP1 dérégulée a été associée à des signalisations oncogéniques, à des mécanismes liés à la neurobiologie et à d’autres processus pathologiques dépendants de la phosphorylation, ce qui soutient des investigations mécanistiques dans des modèles cellulaires humains.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PP1γ (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène PPP1CC dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du PPP1CC, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert PPP1CC à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PP1γ.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en PPP1CC pour l'étude de la signalisation de PP1γ, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de PPP1CC essentiels à la fonction de PP1γ
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de PPP1CC pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le PP1γ plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le PP1γ plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus PPP1CC. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le PP1γ plasmide HDR (h) et le PP1γ (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie PPP1CC pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles PPP1CC définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.