Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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podoplanin Double Nickase Plasmid (h): sc-401332-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das podoplanin Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- podoplanin Double-Nickase-Plasmid (h) und podoplanin Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf PDPN abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: podoplanin: sc-376695
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
podoplanin Double Nickase Plasmid (h) | sc-401332-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
podoplanin Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401332-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Human PDPN kodiert Podoplanin, ein muzinartiges transmembranes Glykoprotein, das über Interaktionen mit ERM-Proteinen und die Umgestaltung des Aktinzytoskeletts Zellform, Adhäsion und Motilität moduliert. Podoplanin fungiert außerdem als zentraler Ligand für CLEC-2, koppelt PDPN-exprimierende Zellen an die Thrombozytenaktivierung und trägt zu lymphatischen sowie gefäßassoziierten Signalprozessen bei. Die PDPN-Expression ist im lymphatischen Endothel und in stromalen Kompartimenten angereichert, wo sie an Gewebeorganisation, epithelial–mesenchymal-ähnlichen Programmen und der Dynamik der extrazellulären Matrix beteiligt ist. Eine dysregulierte Podoplanin-Expression wird mit tumorassoziiertem Stroma, invasiven Phänotypen und entzündlichem Remodeling in Verbindung gebracht, wodurch PDPN ein nützliches Ziel für mechanistische Studien der Signalübertragung im Mikromilieu ist.
podoplanin Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des PDPN-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von PDPN abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die PDPN-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit PDPN-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.