Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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PDK2 Double Nickase Plasmid (h): sc-416916-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das PDK2 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- PDK2 Double-Nickase-Plasmid (h) und PDK2 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf PDK2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: PDK2: sc-100534
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
PDK2 Double Nickase Plasmid (h) | sc-416916-NIC | 20 µg | $410.00 |
Pyruvatdehydrogenase-Kinase 2 (PDK2) ist eine mitochondriale Serin/Threonin-Kinase, die den Pyruvatdehydrogenase-Komplex phosphoryliert und hemmt. Dadurch wird die Umwandlung von Pyruvat zu Acetyl-CoA begrenzt und der Kohlenstofffluss vom Citratzyklus (TCA-Zyklus) weg verschoben. Durch die Regulation des Pyruvat–Laktat-Gleichgewichts und des oxidativen Stoffwechsels verknüpft PDK2 die Nährstoffverfügbarkeit mit der mitochondrialen Atmung sowie der Lipid- und Glukosehomöostase. Die PDK2-Aktivität ist in Signalwege des metabolischen Stresses eingebettet und kann den Umgang mit reaktiven Sauerstoffspezies sowie die bioenergetische Anpassung bei Hypoxie oder Nährstoffüberschuss beeinflussen. Eine fehlregulierte PDK2-Expression oder -Aktivität wurde mit veränderter Insulinsensitivität, metabolischem Remodeling und proliferativen Phänotypen in unterschiedlichen Krankheitskontexten in Verbindung gebracht, was PDK2 als Knotenpunkt zur Untersuchung von Mechanismen der metabolischen Kontrolle stützt.
PDK2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des PDK2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von PDK2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die PDK2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit PDK2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.