Plásmido Doble Nickase (h) PAI-2: sc-402054-NIC

SERPINB2 codifica el inhibidor del activador del plasminógeno tipo 2 (PAI-2), un inhibidor de serinproteasas que restringe principalmente la actividad del activador del plasminógeno tipo uroquinasa (uPA/PLAU) para modular la proteólisis pericelular y la remodelación de la matriz extracelular. Mediante la regulación de la cascada de activación del plasminógeno y de la señalización uPA–uPAR, PAI-2 influye en la migración y adhesión celulares y en programas de remodelación tisular que se entrecruzan con vías inflamatorias y de respuesta a heridas. SERPINB2 es fuertemente inducible por citocinas y endotoxinas en contextos mieloides y epiteliales, lo que vincula su expresión con la activación de la inmunidad innata y con estados de diferenciación de macrófagos. La actividad desregulada de SERPINB2/PAI-2 y sus firmas de expresión se han asociado con alteraciones de la fibrinólisis, inflamación crónica, fibrosis y la dinámica del microambiente tumoral, lo que lo convierte en una diana útil para estudios mecanísticos del equilibrio de proteasas y del diálogo cruzado inmunoestromal.

PAI-2 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus SERPINB2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de SERPINB2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de SERPINB2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con SERPINB2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.