PAI-2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402054-ACT

SERPINB2 codifica o inibidor do ativador do plasminogênio-2 (PAI-2), um inibidor de serino proteases que modula a proteólise pericelular ao inibir o ativador do plasminogênio do tipo uroquinase (uPA/PLAU), influenciando assim a geração de plasmina e o remodelamento da matriz extracelular. O PAI-2 é induzido por sinais inflamatórios e é frequentemente estudado em monócitos/macrófagos, células epiteliais e microambientes tumorais, onde se relaciona com a fibrinólise, a resposta a ferimentos e redes de sinalização reguladas por citocinas. Por meio da regulação de processos ligados a uPA/uPAR, o SERPINB2 afeta a migração e a adesão celulares, bem como cascatas de sinalização dependentes de proteases relevantes para o remodelamento tecidual e a ativação imune. Alterações na expressão de SERPINB2/PAI-2 têm sido associadas a patologias inflamatórias e fenótipos relacionados ao câncer, sustentando seu uso como um nó mecanístico em estudos de proteostase e remodelamento acoplado à inflamação.

PAI-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SERPINB2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PAI-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SERPINB2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SERPINB2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PAI-2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SERPINB2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PAI-2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PAI-2 em células tumorais com expressão de SERPINB2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.