p38 alpha MAPK14 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400057-ACT

MAPK14 kodiert p38α, eine stressaktivierte mitogenaktivierte Proteinkinase, die Signale von Zytokinen, osmotischem Stress, UV-Bestrahlung und pathogenassoziierten Reizen integriert, um Transkription, mRNA-Stabilität und Proteintranslation zu regulieren. p38α (MAPK14) wirkt innerhalb der MAPK-Kaskade nachgeschaltet von MKK3/MKK6 und moduliert Effektoren wie ATF2, ELK1, MAPKAPK2/3 und HSP27, wodurch es inflammatorische Signalwege, Zellzykluskontrolle, Differenzierung und Apoptose mitprägt. Es ist ein zentraler Knotenpunkt in der angeborenen Immunantwort und in Entzündungswegen, einschließlich TNF-, IL‑1- und TLR-Signalgebung, und beeinflusst das Crosstalk mit NF‑κB- sowie interferonresponsiven Programmen. Eine fehlregulierte MAPK14-Aktivität wurde mit chronischen Entzündungen, neurodegenerativen Stressantworten, kardiovaskulärem Remodeling und mehreren krebsassoziierten Phänotypen in Verbindung gebracht, was MAPK14 zu einem häufig untersuchten Ziel für Pathway-Mapping und funktionelle Genomik macht.

p38 alpha MAPK14 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen MAPK14-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

p38 alpha MAPK14 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des MAPK14-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der MAPK14-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen p38 alpha MAPK14-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native MAPK14-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von p38 alpha MAPK14-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des p38 alpha MAPK14-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem MAPK14-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.