MRP2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419711

Panoramica

Abcc2 codifica il trasportatore della famiglia ATP-binding cassette MRP2 (ABCC2), una pompa di efflusso di membrana plasmatica che esporta coniugati del glutatione, del glucuronide e del solfato di metaboliti endogeni e xenobiotici. Nel topo, MRP2 supporta la detossificazione cellulare e l’omeostasi redox accoppiando l’idrolisi dell’ATP al trasporto di anioni organici, inclusi i coniugati della bilirubina e altri metaboliti di fase II. La sua attività si intreccia con le vie di clearance epatica e renale e contribuisce alle funzioni di barriera negli epiteli polarizzati attraverso un traffico coordinato e la localizzazione canalicolare/apicale. L’alterazione della funzione di ABCC2/MRP2 è comunemente studiata nel contesto di fenotipi colestatici, della biologia legata all’iperbilirubinemia e dei meccanismi di resistenza multidrug nei sistemi modello.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO MRP2 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Abcc2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Abcc2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Abcc2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina MRP2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Abcc2 per lo studio della segnalazione di MRP2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Abcc2 critici per la funzione di MRP2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Abcc2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal MRP2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal MRP2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Abcc2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal MRP2 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR MRP2 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Abcc2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Abcc2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.