mitochondrial ferritin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-401694
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- mitochondrial ferritin Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im mitochondrial ferritin-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: mitochondrial ferritin: sc-517048
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
mitochondrial ferritin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) | sc-401694 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
FTMT kodiert das mitochondriale Ferritin, ein Eisenspeicherprotein, das in der Mitochondrienmatrix lokalisiert ist, überschüssiges Eisen sequestriert und die eisengetriebene Bildung reaktiver Sauerstoffspezies (ROS) begrenzt. Durch das Puffern labiler Eisenpools beeinflusst FTMT die Redox-Homöostase der Mitochondrien, die Integrität der oxidativen Phosphorylierung und die zelluläre Antwort auf metabolischen und oxidativen Stress. Seine Funktion greift in den Eisenstoffwechsel sowie die Häm- und Fe–S-Cluster-Biologie ein und verknüpft damit die mitochondriale Funktion mit übergeordneten Eisenverarbeitungswegen. Eine dysregulierte FTMT-Expression wurde mit veränderter Eisenakkumulation und Phänotypen oxidativer Schädigung in Verbindung gebracht, die für Neurodegeneration, stressassoziierte Reaktionen bei Anämie und Modelle mitochondrialer Dysfunktion relevant sind.
Das mitochondrial ferritin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des FTMT-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des FTMT-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von FTMT nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die mitochondrial ferritin-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von FTMT-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der mitochondrial ferritin-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf FTMT-Exone abzielen, die für die mitochondrial ferritin-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere FTMT-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom mitochondrial ferritin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom mitochondrial ferritin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des FTMT-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das mitochondrial ferritin HDR-Plasmid (h) und mitochondrial ferritin HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von FTMT-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten FTMT-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.