MDR3/ABCB4 Lentiviral Activation Particles (h): sc-404167-LAC

ABCB4 (MDR3) kodiert einen kanalikulären ATP‑bindenden Kassetten(ABC)-Transporter in Hepatozyten, der Phosphatidylcholin von der inneren auf die äußere Lipidmembran-Schicht der kanalikulären Membran verlagert, damit es in die Galle sezerniert werden kann. Durch die Bereitstellung von Phospholipiden, die mit Gallensäuren gemischte Mizellen bilden, unterstützt MDR3 die Gallenbildung, den Membranschutz und die hepatobiliäre Lipidhomöostase innerhalb von Signalwegen des Gallensäuretransports und des Lipidtraffickings. Ein Verlust oder eine Verminderung der ABCB4‑Aktivität ist mit cholestatischen Leberphänotypen und einer veränderten Zusammensetzung der Galle verknüpft, wodurch ABCB4 für Studien zu gallensäureinduzierter Schädigung, entzündlicher Signalübertragung und der Regulation von Transporter-Netzwerken relevant ist. ABCB4 wird daher häufig als Modell verwendet, um die Dynamik der kanalikulären Membran und das Cross‑Talk mit anderen hepatischen Transportern zu untersuchen.

MDR3/ABCB4 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente ABCB4-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

MDR3/ABCB4 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der ABCB4-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen MDR3/ABCB4-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen ABCB4-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.