MDR3/ABCB4 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-404167-LAC

ABCB4 (MDR3) codifica um transportador canalicular de hepatócitos da família ABC (ATP-binding cassette) que transloca fosfatidilcolina da face interna para a face externa da membrana canalicular, para secreção na bile. Ao fornecer fosfolipídios que formam micelas mistas com os ácidos biliares, o MDR3 sustenta a formação da bile, a proteção de membranas e a homeostase lipídica hepatobiliar, dentro das vias de transporte de ácidos biliares e de tráfego de lipídios. A perda ou redução da atividade de ABCB4 está associada a fenótipos hepáticos colestáticos e a alterações na composição biliar, tornando-o relevante para estudos de lesão induzida por ácidos biliares, sinalização inflamatória e regulação de redes de transportadores. Assim, o ABCB4 é amplamente utilizado como modelo para investigar a dinâmica da membrana canalicular e a comunicação cruzada com outros transportadores hepáticos.

As Partículas de Ativação Lentivirais MDR3/ABCB4 (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de ABCB4 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais MDR3/ABCB4 (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição ABCB4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de MDR3/ABCB4. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo ABCB4 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.