Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
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LLH1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422311
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- LLH1 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico LLH1, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: LLH1 Antibody (B-5): sc-271640
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
LLH1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m) | sc-422311 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
Plod1 codifica la lisil idrossilasi 1 (LLH1), un enzima del reticolo endoplasmatico che idrossila specifici residui di lisina nei procollageni, consentendo la successiva glicosilazione e stabilizzando i legami crociati del collagene. Attraverso la regolazione della maturazione del collagene e dell’organizzazione della matrice extracellulare, LLH1 influenza l’integrità del tessuto connettivo, la struttura della membrana basale e le vie di rimodellamento tissutale. L’alterazione dell’attività di Plod1 è associata ad anomalie nella fibrillogenesi del collagene e nella meccanica della matrice, processi rilevanti per la biologia della fibrosi, per fenotipi di fragilità vascolare e cutanea e per studi sul microambiente tumorale in modelli murini. Di conseguenza, Plod1 è comunemente studiato in contesti di segnalazione guidata dalla ECM, interazioni cellula–matrice e meccanotrasduzione.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO LLH1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Plod1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Plod1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Plod1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina LLH1.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Plod1 per lo studio della segnalazione di LLH1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni Plod1 critici per la funzione di LLH1
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Plod1 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal LLH1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal LLH1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Plod1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal LLH1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR LLH1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Plod1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Plod1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.