KLC1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401881-ACT

Humanes KLC1 (Kinesin Light Chain 1) kodiert eine Leichtketten‑Untereinheit des Kinesin‑1‑Motorkomplexes, die Cargo‑Adapter mit dem mikrotubuli‑basierten Transport verbindet. Durch die Zusammenarbeit mit Kinesin‑Schwerketten und Cargo‑bindenden Proteinen unterstützt KLC1 den anterograden Transport von Vesikeln, Organellen und Proteinkomplexen, der für neuronale Polarität, axonalen Transport und die räumliche Kontrolle von Signalgebung essenziell ist. Der KLC1‑abhängige Transport greift in Signalwege ein, die endosomalen Transport, mitochondriale Verteilung und synaptische Funktion steuern; eine gestörte Cargo‑Lieferung kann dabei die Proteostase und Stressantworten beeinträchtigen. Veränderungen der KLC1‑Expression oder der Cargo‑Kopplung wurden im Zusammenhang mit Neurodegeneration und anderen Erkrankungen untersucht, die durch Transportdefekte und eine dysregulierte intrazelluläre Trafficking‑Maschinerie gekennzeichnet sind.

KLC1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen KLC1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

KLC1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des KLC1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der KLC1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen KLC1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native KLC1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von KLC1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des KLC1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem KLC1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.