IRP-1 Double Nickase Plasmid (h): sc-401817-NIC

Das humane ACO1-Gen kodiert das Iron Regulatory Protein 1 (IRP-1), ein bifunktionales zytosolisches Protein, das zwischen einem [4Fe–4S]-Aconitase-Enzym und einem RNA-bindenden Regulator des Eisenstoffwechsels wechselt. Unter eisenlimitierenden oder oxidativen Bedingungen bindet IRP-1 an iron-responsive Elemente (IREs) in Ziel-mRNAs und steuert so Translation und Stabilität zentraler Gene der Eisenhomöostase wie Ferritin, Transferrinrezeptor und Ferroportin; dadurch wird die Biogenese von Eisen-Schwefel-Clustern mit der posttranskriptionellen Genregulation verknüpft. Dieser Umschaltmechanismus ist in die zelluläre Redoxhomöostase, den mitochondrialen Stoffwechsel und hypoxieadaptive Programme eingebunden, indem er die Eisenverfügbarkeit für die Hämsynthese und für Fe–S-Enzyme fein abstimmt. Eine Fehlregulation der IRP-1/IRE-Signalkaskade wird u. a. im Zusammenhang mit Anämie und Eisenüberladung, Neurodegeneration, metabolischem Remodeling von Krebszellen sowie inflammatorischem Stress untersucht, bei denen die Eisenverwertung oxidativen Schaden und die Proliferationsfähigkeit beeinflusst.

IRP-1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ACO1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ACO1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ACO1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.

Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ACO1-Störung.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.