Plásmido Doble Nickase (h) IRP-1: sc-401817-NIC

El ACO1 humano codifica la proteína reguladora del hierro 1 (IRP-1), una proteína citosólica bifuncional que alterna entre una enzima aconitasa con clúster [4Fe–4S] y un regulador del metabolismo del hierro con capacidad de unión a ARN. En condiciones de limitación de hierro o de estrés oxidativo, la IRP-1 se une a los elementos de respuesta al hierro (IRE) en los ARNm diana para controlar la traducción y la estabilidad de genes clave en el manejo del hierro, como la ferritina, el receptor de transferrina y la ferroportina, conectando la biogénesis de clústeres hierro-azufre con la regulación génica postranscripcional. Este cambio se integra con la homeostasis redox celular, el metabolismo mitocondrial y los programas adaptativos a la hipoxia al ajustar la disponibilidad de hierro para la síntesis de hemo y para enzimas Fe–S. La señalización IRP-1/IRE desregulada se estudia en contextos de anemia y sobrecarga férrica, neurodegeneración, remodelación metabólica de células cancerosas y estrés inflamatorio, donde el manejo del hierro influye en el daño oxidativo y la capacidad proliferativa.

IRP-1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ACO1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ACO1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ACO1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ACO1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.