IP3KA Double Nickase Plasmid (h): sc-404638-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das IP3KA Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- IP3KA Double-Nickase-Plasmid (h) und IP3KA Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf ITPKA abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: IP3KA: sc-271838
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
IP3KA Double Nickase Plasmid (h) | sc-404638-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
IP3KA Double Nickase Plasmid (h2) | sc-404638-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das humane Gen **ITPKA** kodiert die Inositoltrisphosphat-3-Kinase A (IP3KA), ein Ca2+/Calmodulin-reguliertes Enzym, das Inositol-1,4,5-trisphosphat (IP3) phosphoryliert und dadurch IP4 erzeugt, wodurch es die Dynamik der intrazellulären Kalziumsignalgebung mitprägt. Durch die Modulation der IP3-abhängigen Ca2+-Freisetzung aus dem endoplasmatischen Retikulum beeinflusst IP3KA synaptische Funktionen, das Zytoskelett-Remodeling sowie aktivitätsabhängige Signalprogramme, einschließlich Signalwege, die Kalziumtransienten mit Transkriptionsantworten koppeln. In Neuronen ist IP3KA in dendritischen Dornen (Spines) angereichert und wurde über die Regulation Ca2+-sensitiver Effektoren mit Mechanismen in Verbindung gebracht, die Plastizität und Erregbarkeit zugrunde liegen. Eine veränderte IP3/IP4-Balance und Kalziumhomöostase infolge einer Dysregulation von ITPKA ist für die Neurobiologie relevant und wurde zudem in Krankheitsmodellen im Zusammenhang mit aberranter Signalgebung und veränderten Migrationsphänotypen untersucht.
IP3KA Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ITPKA-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ITPKA abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ITPKA-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ITPKA-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.