Integrin β6/ITGB6 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400999-ACT

ITGB6 kodiert die Integrin-β6-Untereinheit, die sich mit Integrin αV zum αVβ6-Heterodimer zusammenschließt. Dieses vermittelt die Adhäsion epithelialer Zellen an Liganden der extrazellulären Matrix und reguliert Migration, Polarität und Gewebeumbau. αVβ6 aktiviert in Abhängigkeit vom Kontext latentes TGF-β über Interaktionen mit RGD-haltigen Proteinen und verknüpft ITGB6 damit mit der TGF-β/SMAD-Signalübertragung, der epithelial-mesenchymalen Transition und Programmen der Wundheilung. Eine aberrante ITGB6-Expression und eine veränderte αVβ6-Funktion wurden mit fibrotischem Remodeling sowie tumorassoziierter Invasion und Metastasierung bei mehreren epithelialen Krebsarten in Verbindung gebracht, wobei das System das lokale Mikromilieu und inflammatorische Signalwege modulieren kann. Als Oberflächenrezeptor, der ECM-Signale mit intrazellulärer Signalübertragung integriert, wird ITGB6 häufig zur Untersuchung von Mechanotransduktion, Zell-Matrix-Kommunikation und TGF-β-getriebenen transkriptionellen Antworten eingesetzt.

Integrin β6/ITGB6 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen ITGB6-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Integrin β6/ITGB6 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des ITGB6-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der ITGB6-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Integrin β6/ITGB6-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native ITGB6-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Integrin β6/ITGB6-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Integrin β6/ITGB6-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem ITGB6-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.