IGFBP5 Plasmide Double Nickase (h): sc-400945-NIC

IGFBP5 (insulin-like growth factor binding protein 5) è un regolatore secreto, associato alla matrice extracellulare, della segnalazione degli IGF che modula la disponibilità di IGF-I/IGF-II e l’interazione con i recettori, influenzando così l’output delle vie PI3K–AKT e MAPK. Oltre al sequestro degli IGF, IGFBP5 partecipa a programmi di adesione, migrazione e sopravvivenza cellulare attraverso interazioni con la matrice ed effetti IGF-indipendenti dipendenti dal contesto. Nei tessuti umani, l’espressione di IGFBP5 è collegata a processi di differenziamento e rimodellamento, incluse risposte osteogeniche e fibrotiche, ed è spesso studiata in contesti in cui un’alterata segnalazione dei fattori di crescita influisce sulla proliferazione e sulla dinamica della matrice extracellulare. Un’attività deregolata di IGFBP5 è stata associata a rimodellamento patologico e alla biologia tumorale, rendendola rilevante per studi meccanicistici della regolazione della crescita e della segnalazione del microambiente.

IGFBP5 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus IGFBP5 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di IGFBP5. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di IGFBP5. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con IGFBP5 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.