Plásmido Doble Nickase (h) IGFBP5: sc-400945-NIC

IGFBP5 (proteína 5 de unión al factor de crecimiento similar a la insulina) es un regulador secretado y asociado a la matriz extracelular de la señalización de IGF que modula la disponibilidad de IGF-I/IGF-II y su interacción con el receptor, influyendo así en la actividad de las vías PI3K–AKT y MAPK. Además del secuestro de IGF, IGFBP5 participa en programas de adhesión, migración y supervivencia celular a través de interacciones con la matriz y de efectos independientes de IGF dependientes del contexto. En tejidos humanos, la expresión de IGFBP5 se vincula con procesos de diferenciación y remodelado, incluidas respuestas osteogénicas y fibróticas, y se estudia con frecuencia en contextos en los que una señalización alterada de factores de crecimiento afecta a la proliferación y a la dinámica de la matriz extracelular. La actividad desregulada de IGFBP5 se ha asociado con el remodelado patológico y la biología tumoral, lo que la hace relevante para estudios mecanísticos de la regulación del crecimiento y de la señalización del microambiente.

IGFBP5 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus IGFBP5 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de IGFBP5. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de IGFBP5. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con IGFBP5 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.