G3BP1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400745-ACT

ヒトG3BP1（G3BPストレス顆粒形成因子1）はRNA結合タンパク質であり、ストレス顆粒（stress granule）の形成を核化し、細胞ストレス下でのmRNAの選別・振り分け（トリアージ）を統括する。mRNAの安定性、翻訳開始、リボ核タンパク質複合体（RNP）のリモデリングを制御することで、翻訳制御および自然免疫経路からのシグナルを統合し、その下流でアポトーシス、抗ウイルス応答、細胞周期プログラムに影響を及ぼす。G3BP1は、eIF2αを介した翻訳停止、MAPKシグナル伝達、RNA代謝に関連するストレス適応過程に関与し、その機能不全は複数の疾患状況においてストレス耐性の変化や異常増殖と関連づけられている。G3BP1はRNAプロセシングとストレス応答性シグナル伝達を結び付けるため、腫瘍生物学、神経変性、宿主―病原体相互作用のモデルで広く研究されている。

G3BP1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性G3BP1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

G3BP1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における G3BP1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はG3BP1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性G3BP1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のG3BP1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるG3BP1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびG3BP1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるG3BP1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。