Fibulin-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-420294

概要

Fbln1はフィブリン-1（Fibulin-1）をコードしており、フィブリン-1は分泌性の細胞外マトリックス（ECM）糖タンパク質です。基底膜や弾性線維と会合して、マトリックスの組み立て、組織の弾性、ならびに細胞―マトリックス間シグナル伝達を調節します。フィブリン-1はフィブロネクチン、ラミニン、プロテオグリカンなどの構造・接着関連成分と相互作用し、フォーカルアドヒージョンのダイナミクス、細胞移動、メカノトランスダクションに影響を与えます。マウス系では、Fbln1の発現やマトリックスへの取り込みの変化が、血管および結合組織の構築異常や、線維化や腫瘍随伴ストローマ変化に関連するリモデリング過程と結び付けられています。これらの機能により、フィブリン-1はECM恒常性や微小環境による細胞表現型制御を解析するうえで有用な結節点となります。

Fibulin-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるFbln1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Fbln1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Fbln1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Fibulin-1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Fibulin-1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Fbln1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Fibulin-1の機能に不可欠なFbln1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Fbln1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Fibulin-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびFibulin-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Fbln1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Fibulin-1 HDRプラスミド（m）および Fibulin-1 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはFbln1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のFbln1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。