Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
FAAH Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-402470
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- FAAH Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico FAAH, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: FAAH Antibody (27-Y): sc-100739
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
FAAH Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-402470 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
FAAH (fatty acid amide hydrolase) è un’idrolasi a serina associata alla membrana che termina la segnalazione idrolizzando ammidi di acidi grassi bioattive, tra cui l’endocannabinoide anandamide e le N-aciletanolammine correlate. Controllando il turnover dei mediatori lipidici, FAAH modula il tono endocannabinoide, interagisce con la segnalazione dei recettori CB1/CB2 e influenza a valle le vie dipendenti da cAMP/PKA, MAPK e dal calcio. L’attività di FAAH contribuisce inoltre a plasmare reti metaboliche lipidiche più ampie che regolano le risposte cellulari allo stress e la neurotrasmissione. Alterazioni dell’espressione o della funzione di FAAH sono state associate a una disregolazione delle vie neuroinfiammatorie e di elaborazione del dolore e sono studiate nel contesto di fenotipi neuropsichiatrici e metabolici.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO FAAH (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene FAAH in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del FAAH insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto FAAH a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina FAAH.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di FAAH per lo studio della segnalazione di FAAH, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni FAAH critici per la funzione di FAAH
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di FAAH per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal FAAH CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal FAAH CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus FAAH. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal FAAH Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR FAAH (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia FAAH per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio FAAH definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.