Ero1-Lα CRISPR Activation Plasmid (m): sc-424456-ACT

Das murine Gen **Ero1l** kodiert **ER-Oxidoreduktin 1 alpha (Ero1-Lα)**, ein Flavoprotein des endoplasmatischen Retikulums, das **Protein-Disulfid-Isomerasen** wieder oxidiert und dadurch die **Disulfidbrückenbildung** während der oxidativen Proteinfaltung unterstützt. Durch die Kopplung der Thioloxidation an einen **FAD-abhängigen Elektronentransfer** trägt Ero1-Lα zur **Redoxhomöostase** im ER bei und steht in Verbindung mit der **unfolded protein response (UPR)**, dem **ER-assoziierten Abbau (ERAD)** sowie der **Proteostase** des sekretorischen Wegs. Eine veränderte Ero1-Lα-Aktivität kann oxidativen Stress sowie Signalwege des **Kalzium- und ER-Stresses** verschieben und verbindet die Regulation von Ero1l mit Kontexten wie **Hypoxieanpassung**, **Entzündung** und tumorassoziierten Anforderungen an die Sekretion. Diese Eigenschaften machen **Ero1l** zu einem nützlichen Ziel, um die redoxkontrollierte Reifung sekretierter und membranständiger Proteine sowie das stressabhängige Remodeling der ER-Funktion zu untersuchen.

Ero1-Lα Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Ero1l-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Ero1-Lα Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Ero1l-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Ero1l-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Ero1-Lα-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Ero1l-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Ero1-Lα-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Ero1-Lα-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Ero1l-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.