Epac CRISPR/Cas9 KO Plasmid (r): sc-437373
- Zielspezies: rat
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Epac Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (r) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im Epac-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Epac: sc-28366
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Epac CRISPR/Cas9 KO Plasmid (r) | sc-437373 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
Epac (Exchange Protein Directly Activated by cAMP; Familie RAPGEF3/RAPGEF4) ist ein cAMP-reaktiver Guanin-Nukleotid-Austauschfaktor, der Rap1 und Rap2 unabhängig von PKA aktiviert. Über die Rap-GTPase-Signalgebung reguliert Epac integrinvermittelte Adhäsion, Zytoskelett-Remodeling, Vesikeltransport und Eigenschaften der endothelialen Barriere und beeinflusst damit Zellmigration und die Stabilität von Zell-Zell-Kontakten. Epac-abhängige cAMP-Signalwege greifen zudem in die MAPK/ERK- und PI3K-AKT-Signalgebung ein, um Entzündungsreaktionen und zelluläre Stress-Signalwege zu modulieren. Eine fehlregulierte Epac-Rap-Signalgebung wurde mit kardiovaskulären und neurobiologischen Prozessen in Verbindung gebracht, darunter veränderte Gefäßpermeabilität und neuronale Erregbarkeit, was Epac als mechanistisches Ziel in krankheitsrelevanten Rattenmodellen unterstützt.
Das Epac CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (r) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des -Gens in rat-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des -Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Epac-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von -defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Epac-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf -Exone abzielen, die für die Epac-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere -Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom Epac CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (r) und vom Epac CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (r2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des -Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Epac HDR-Plasmid (r) und Epac HDR-Plasmid (r2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von -Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten -Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.