eIF5 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-402133-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- eIF5O plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase eIF5 (h) e o Plasmídeo Double Nickase eIF5 (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para EIF5. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:eIF5 Anticorpo (E-10): sc-28309
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
eIF5 Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-402133-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
eIF5 Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-402133-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
EIF5 codifica o fator eucariótico de iniciação da tradução 5 (eIF5), um regulador central da iniciação da tradução que atua como uma proteína ativadora de GTPase para o eIF2, promovendo o reconhecimento do códon de iniciação e a montagem produtiva do ribossomo 80S. Ao modular a hidrólise de eIF2–GTP e a fidelidade do “scanning”, o eIF5 ajuda a coordenar a síntese proteica global com respostas celulares ao estresse e o controle do crescimento, interagindo com vias como a sinalização de eIF2 e a resposta integrada ao estresse. Alterações no controle translacional envolvendo o eIF5 têm sido associadas à proliferação desregulada e à proteostase, tornando o EIF5 um ponto útil para estudar como a dinâmica dos fatores de iniciação influencia programas oncogênicos e de adaptação ao estresse. Em células humanas, a perturbação de EIF5 pode revelar dependências em reprogramação translacional, iniciação específica de determinados mRNAs e na biologia de grânulos de estresse.
eIF5 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus EIF5 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de EIF5. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função EIF5. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com EIF5 interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.