Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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EDG-1/S1P1/S1PR1 Double Nickase Plasmid (h): sc-400413-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das EDG-1/S1P1/S1PR1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- EDG-1/S1P1/S1PR1 Double-Nickase-Plasmid (h) und EDG-1/S1P1/S1PR1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf S1PR1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: EDG-1/S1P1/S1PR1: sc-48356
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
EDG-1/S1P1/S1PR1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-400413-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
EDG-1/S1P1/S1PR1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400413-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
S1PR1 (EDG-1/S1P1) kodiert einen G‑Protein‑gekoppelten Rezeptor für Sphingosin‑1‑phosphat, der die Integrität der Endothelbarriere, die Gefäßreifung und den Transport von Immunzellen reguliert. Die Rezeptoraktivierung löst ein Gi‑abhängiges Signalprogramm aus, mit nachgeschalteten PI3K‑AKT‑, MAPK/ERK‑ und Rho‑Familien‑GTPase‑Signalwegen, die die Zytoskelettdynamik, die Organisation von Adhärenskontakten und chemotaktische Antworten prägen. In hämatopoetischen und vaskulären Kontexten trägt S1PR1 durch die Integration in Zytokin‑ und Chemokinnetzwerke zur Lymphozytenauswanderung, zum angiogenen Aussprossen und zum Entzündungstonus bei. Eine fehlregulierte S1PR1‑Signalgebung wurde in Studien zu Entzündung, kardiovaskulärer Biologie und Tumormikroumgebung mit veränderter Gefäßpermeabilität und Immunhomöostase in Verbindung gebracht, was seine Nutzung als mechanistischen Knotenpunkt in der Rezeptorsignal‑Forschung unterstützt.
EDG-1/S1P1/S1PR1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des S1PR1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von S1PR1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die S1PR1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit S1PR1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.