EDG-1/S1P1/S1PR1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-400413

Übersicht

S1PR1 (EDG-1/S1P1) kodiert einen G‑Protein‑gekoppelten Rezeptor für Sphingosin‑1‑phosphat (S1P), der extrazelluläre Lipidsignale in intrazelluläre Programme übersetzt, die Zellmigration, Überleben und Barrierefunktion steuern. Über die Kopplung an Gi und nachgeschaltete Effektoren wie PI3K–AKT, MAPK/ERK und Rho‑Familien‑GTPasen reguliert S1PR1 die Zytoskelettdynamik, Adhäsion und die endotheliale Permeabilität. Es ist ein zentraler Knotenpunkt der S1P‑Signalwegbiologie, der die Gefäßentwicklung und den Transport von Immunzellen beeinflusst; eine Fehlregulation wird mit entzündungsassoziierter vaskulärer Dysfunktion und dem Umbau des Tumormikromilieus in Verbindung gebracht. Als Membranrezeptor mit kontextabhängigen Signalausgängen wird S1PR1 häufig in Modellen der Angiogenese, der Leukozytenauswanderung und der endothelialen Homöostase untersucht.

Das EDG-1/S1P1/S1PR1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des S1PR1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des S1PR1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von S1PR1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die EDG-1/S1P1/S1PR1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von S1PR1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der EDG-1/S1P1/S1PR1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf S1PR1-Exone abzielen, die für die EDG-1/S1P1/S1PR1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere S1PR1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom EDG-1/S1P1/S1PR1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom EDG-1/S1P1/S1PR1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des S1PR1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das EDG-1/S1P1/S1PR1 HDR-Plasmid (h) und EDG-1/S1P1/S1PR1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von S1PR1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten S1PR1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.