DLD Lentiviral Activation Particles (h): sc-403207-LAC

Das humane DLD kodiert die Dihydrolipoamid-Dehydrogenase, eine mitochondriale, FAD‑abhängige Oxidoreduktase, die oxidiertes Lipoamid regeneriert und so den katalytischen Zyklus mehrerer Dehydrogenasekomplexe aufrechterhält. Als E3‑Untereinheit, die von Pyruvatdehydrogenase, α‑Ketoglutaratdehydrogenase und der verzweigtkettigen α‑Ketosäure‑Dehydrogenase gemeinsam genutzt wird, verknüpft DLD den Eintritt von Kohlenstoff aus der Glykolyse und den Fluss durch den TCA‑Zyklus mit dem Aminosäureabbau und der Redoxhomöostase über die NADH‑Produktion. Die DLD‑Aktivität trägt zum mitochondrialen Energiestoffwechsel und zum Gleichgewicht reaktiver Sauerstoffspezies bei und ist damit mit Signalwegen verbunden, die Stoffwechselstress‑Antworten prägen. Genetische oder funktionelle Störungen von DLD wurden mit mitochondrialen Stoffwechselerkrankungen und veränderter zellulärer Bioenergetik in Verbindung gebracht, was seinen Einsatz in Studien zu neurometabolischen Phänotypen und Mechanismen mitochondrialer Dysfunktion unterstützt.

DLD Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente DLD-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

DLD Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der DLD-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen DLD-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen DLD-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.