DDT Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-418461

Panoramica

La DDT (D-dopachrome tautomerase), nota anche come MIF-2, è un enzima di tipo citochinico che partecipa alla segnalazione immunitaria e alle risposte allo stress cellulare, operando in parallelo all’asse del MIF. Contribuisce alla regolazione della produzione di mediatori infiammatori, al reclutamento dei leucociti e alla segnalazione pro-sopravvivenza attraverso vie che, a seconda del contesto cellulare e dei recettori coinvolti, intersecano le reti MAPK/ERK e NF-κB. L’espressione di DDT è stata associata alla modulazione dell’attività immunitaria innata e adattativa, con una rilevanza riportata nell’infiammazione associata ai tumori, in fenotipi autoimmuni e nella disregolazione metabolica. In quanto fattore solubile dotato di attività enzimatica, DDT rappresenta un nodo “maneggevole” per analizzare come la segnalazione citochinica si integri con programmi di redox, proliferazione e migrazione nelle cellule umane.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO DDT (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene DDT in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del DDT insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto DDT a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina DDT.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di DDT per lo studio della segnalazione di DDT, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni DDT critici per la funzione di DDT
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di DDT per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal DDT CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal DDT CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus DDT. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal DDT Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR DDT (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia DDT per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio DDT definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.