Plasmide Double Nickase (h) CyPA: sc-418155-NIC

PPIA code la cyclophiline A (CyPA), une peptidyl-prolyl cis–trans isomérase ubiquitaire qui accélère le repliement des protéines et les changements conformationnels dans le cytosol et le noyau. CyPA module la protéostasie et les voies de signalisation sensibles au stress, notamment des voies associées aux chaperonnes, ainsi que la régulation de l’activité de kinases et de facteurs de transcription influençant l’apoptose, l’inflammation et la progression du cycle cellulaire. Par ses interactions avec des partenaires tels que CD147/BSG et divers protéines clientes, CyPA peut façonner le trafic des leucocytes et les réponses au stress oxydatif, ce qui l’associe à des processus cardiovasculaires, neuro-inflammatoires et liés aux tumeurs. Des altérations de l’expression de PPIA ou de l’activité de CyPA ont été rapportées dans de multiples contextes pathologiques, ce qui en fait une cible utile pour des études mécanistiques sur la signalisation, l’homéostasie protéique et les interactions hôte–pathogène.

CyPA Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus PPIA dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de PPIA. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de PPIA. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de PPIA.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.