Plasmide Double Nickase (h) CLN5: sc-408473-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) CLN5 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide CLN5 Double Nickase (h) et le plasmide CLN5 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant CLN5. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: CLN5 Antibody (D-8): sc-374672
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) CLN5 | sc-408473-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) CLN5 | sc-408473-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CLN5 code une glycoprotéine lysosomale soluble impliquée dans le trafic endolysosomal et la protéostasie, contribuant au bon fonctionnement des lysosomes et au renouvellement des macromolécules cellulaires. L’activité de CLN5 est liée à des voies associées aux lysosomes, notamment le flux autophagie-lysosome, le transport vésiculaire et le maintien de l’homéostasie neuronale. Des variants avec perte de fonction de CLN5 sont associés à la lipofuscinose céroïde neuronale, caractérisée par une pathologie de stockage lysosomal et une neurodégénérescence progressive, faisant de CLN5 une cible clé pour l’étude des mécanismes de dysfonctionnement lysosomal. Dans des modèles cellulaires humains, la perturbation de CLN5 est couramment utilisée pour étudier la maturation des enzymes lysosomales, le tri du cargo et l’accumulation de matériel de stockage.
CLN5 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CLN5 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CLN5. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CLN5. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CLN5.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.