CLN1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404018-ACT

PPT1は、パルミトイルプロテイン・チオエステラーゼ1（CLN1）をコードしており、リソソームに局在する脱パルミトイル化酵素として、S-アシル化タンパク質からチオエステル結合した脂肪酸アシル基を除去し、それらのターンオーバーと細胞内輸送を支えます。リソソームのプロテオスタシスや脂質修飾タンパク質の分解を制御することで、CLN1はエンドリソソーム動態、オートファジー—リソソーム機能、そして神経細胞の恒常性に影響を及ぼします。PPT1活性の欠失は、自己蛍光性の貯蔵物質の蓄積と進行性の神経変性を特徴とする神経セロイドリポフスチン症（CLN1病）と関連しています。そのためPPT1/CLN1は、リソソーム生物学、タンパク質品質管理、ならびに神経変性を伴う貯蔵病の発症機構の研究において広く解析されています。

CLN1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性PPT1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

CLN1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における PPT1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPPT1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性CLN1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPPT1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCLN1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPPT1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCLN1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。