CD79B CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401760-ACT

CD79B kodiert die Ig-β‑(B29)-Untereinheit des B‑Zell-Antigenrezeptor(BCR)-Komplexes und bildet mit CD79A ein signalgebendes Heterodimer, das für die Oberflächenexpression des BCR und die antigeninduzierte Signaltransduktion erforderlich ist. Nach Antigenbindung initiiert die Phosphorylierung des ITAM von CD79B die nachgeschaltete Aktivierung von SYK sowie die Weiterleitung über die BTK-, PI3K–AKT- und NF-κB/MAPK-Signalwege, wodurch B‑Zell-Aktivierung, Überleben und Differenzierung reguliert werden. Eine veränderte CD79B-Expression oder Signalübertragungskompetenz kann die Output-Stärke des BCR-Signalwegs und die Dynamik der Immunrezeptor-Signalgebung neu ausrichten. Die Fehlregulation von Komponenten der BCR-Signalgebung, einschließlich CD79B, wird häufig im Kontext der B‑Zellentwicklung, von Immunstörungen und der Biologie von B‑Zell-Malignomen untersucht.

CD79B Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CD79B-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

CD79B Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CD79B-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CD79B-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen CD79B-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CD79B-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von CD79B-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des CD79B-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CD79B-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.