Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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CCNB1/cyclin B1 Double Nickase Plasmid (h): sc-400114-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das CCNB1/cyclin B1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- CCNB1/cyclin B1 Double-Nickase-Plasmid (h) und CCNB1/cyclin B1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CCNB1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: CCNB1/cyclin B1: sc-245
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
CCNB1/cyclin B1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-400114-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CCNB1/cyclin B1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400114-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CCNB1 kodiert Cyclin B1, eine zentrale regulatorische Untereinheit des CDK1-Kinasekomplexes, der den Übergang von G2 nach M antreibt und den Eintritt in die Mitose koordiniert. Die Anreicherung von Cyclin B1 und seine Translokation in den Zellkern fördern über streng zeitlich abgestimmte Phosphorylierungskaskaden Prozesse wie Chromosomenkondensation, Auflösung der Kernhülle und Spindelaufbau. Die CCNB1-Aktivität ist in Checkpoint-Signalwege wie ATR/CHK1 sowie den Spindelkontrollpunkt integriert, um die genomische Stabilität sicherzustellen. Eine dysregulierte CCNB1-Expression oder ein gestörter Abbau wird häufig mit proliferativen Zuständen und chromosomaler Instabilität in Verbindung gebracht, weshalb CCNB1 in der Zellzyklus- und Krebsbiologieforschung ein weit verbreiteter Marker und mechanistischer Knotenpunkt ist.
CCNB1/cyclin B1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CCNB1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CCNB1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CCNB1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CCNB1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.