Particules Lentivirales d'Activation (m) B7RP-1: sc-424469-LAC

Le gène murin *Icosl* code B7RP‑1 (également appelé ligand d’ICOS/CD275), une molécule co‑stimulatrice de la famille B7 exprimée par les cellules présentatrices d’antigène, qui se lie à ICOS sur les lymphocytes T activés. Cette interaction amplifie la signalisation PI3K–Akt et les programmes transcriptionnels en aval qui soutiennent l’expansion, la survie et la différenciation effectrice des lymphocytes T, et elle contribue à la formation des centres germinatifs en régulant la fonction des lymphocytes T auxiliaires folliculaires et l’aide aux lymphocytes B. La signalisation B7RP‑1–ICOS participe à l’orientation des réponses immunitaires adaptatives au niveau des muqueuses et des tissus périphériques, et elle est fréquemment étudiée dans les contextes de la tolérance immunitaire, de l’inflammation et de l’auto‑immunité. Des dérégulations des voies impliquant ICOSL ont été associées à des altérations de l’immunité humorale et à des phénotypes inflammatoires chroniques, faisant d’*Icosl* une cible pertinente pour des recherches mécanistiques en immunologie.

Les particules d'activation lentivirales B7RP-1 (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Icosl dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales B7RP-1 (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Icosl, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de B7RP-1. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Icosl ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.