Aspartoacylase Double Nickase Plasmid (h): sc-405771-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Aspartoacylase Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Aspartoacylase Double-Nickase-Plasmid (h) und Aspartoacylase Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf ASPA abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Aspartoacylase: sc-377308
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Aspartoacylase Double Nickase Plasmid (h) | sc-405771-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Aspartoacylase Double Nickase Plasmid (h2) | sc-405771-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das humane ASPA-Gen kodiert Aspartoacylase, eine zinkabhängige Hydrolase, die N‑Acetyl‑L‑Aspartat (NAA) deacetyliert und dabei Acetat sowie L‑Aspartat erzeugt. Dadurch unterstützt sie den Kohlenstofffluss für die Lipidsynthese und die metabolische Kopplung zwischen Neuronen und Glia im zentralen Nervensystem. Durch die Regulation des NAA-Umsatzes trägt ASPA zu myelinbezogenen Prozessen und zur Verfügbarkeit von Acetat bei, das in Acetyl‑CoA‑abhängigen Signal- und Stoffwechselwegen genutzt wird, darunter Membranbiogenese und Proteinacetylierung. Loss-of-function-Varianten in ASPA sind mit der Canavan-Krankheit assoziiert, einer Leukodystrophie, die durch eine abnorme NAA-Akkumulation und Dysmyelinisierung gekennzeichnet ist; damit ist ASPA ein zentrales Ziel für die Untersuchung des neuroentwicklungsbezogenen Stoffwechsels und der Glia-Biologie. Modelle mit ASPA-Störung werden häufig eingesetzt, um die Homöostase von Metaboliten, die Oligodendrozytenfunktion sowie nachgeschaltete transkriptionelle und bioenergetische Anpassungen zu analysieren.
Aspartoacylase Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ASPA-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ASPA abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ASPA-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ASPA-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.