AHCYL1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-417109-ACT

Das humane Gen **AHCYL1** kodiert **Adenosylhomocysteinase-like 1**, ein nicht-katalytisches Paralog der **S-Adenosylhomocystein-Hydrolase**, das als regulatorische Komponente fungiert und die Transmethylierungskapazität mit intrazellulärer Signalübertragung verknüpft. AHCYL1 wird mit der Modulation der **inositol-1,4,5-trisphosphat-Rezeptor (IP3R)**-abhängigen **Calciumdynamik** und damit verbundenen Programmen wie **ER-assoziierter Signalgebung**, **metabolischer Anpassung** und **Stressantworten** in Verbindung gebracht. Über diese Zusammenhänge kann die AHCYL1-Expression epigenetische und transkriptionelle Outputs beeinflussen, die nachgeschaltet von Methylierung sowie Ca²⁺-responsiven Signalwegen liegen. Eine Dysregulation des Methylierungsgleichgewichts und der Ca²⁺-Signalgebung wird häufig in entzündlichen, neurobiologischen und onkogenen Kontexten beobachtet, wodurch AHCYL1 einen nützlichen Knotenpunkt für mechanistische Untersuchungen in krankheitsrelevanten Zellmodellen darstellt.

AHCYL1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen AHCYL1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

AHCYL1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des AHCYL1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der AHCYL1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen AHCYL1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native AHCYL1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von AHCYL1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des AHCYL1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem AHCYL1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.