Plasmide Double Nickase (h) Adducin α: sc-401693-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Adducin α correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Adducin α Double Nickase (h) et le plasmide Adducin α Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant ADD1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Adducin α Antibody (4D1): sc-33633
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Adducin α | sc-401693-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Adducin α | sc-401693-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ADD1 code pour l’adducine α, une protéine du cytosquelette membranaire qui coiffe et regroupe les filaments d’actine et favorise l’assemblage du réseau spectrine–actine au niveau du cortex cellulaire. En régulant l’organisation du cytosquelette, la forme cellulaire et la stabilité de la membrane, l’adducine α contribue à des processus tels que l’adhérence cellulaire, la motilité et la résistance mécanique des érythrocytes et d’autres types cellulaires. Son activité est modulée par des voies de signalisation dépendantes de la phosphorylation, notamment la protéine kinase C et les voies de la famille Rho, qui ajustent le remodelage de l’actine et la tension corticale. La dérégulation des dynamiques cytosquelettiques associées à ADD1 a été étudiée en lien avec des propriétés membranaires altérées et des phénotypes liés à la pression artérielle, ce qui étaye son intérêt comme cible en mécanobiologie et en recherche sur les cellules vasculaires.
Adducin α Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ADD1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ADD1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ADD1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ADD1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.