ACTG1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400006-ACT

ACTG1は細胞質γアクチンをコードしており、細胞の形状、皮質張力、機械的完全性を支えるアクチン細胞骨格の中核構成要素です。ACTG1は、フィラメントの動的な重合・脱重合やアクチン結合タンパク質との相互作用を通じて、細胞移動、接着、エンドサイトーシス、細胞質分裂などの過程に関与し、Rho GTPaseにより制御される細胞骨格リモデリング経路と統合的に働きます。ACTG1の量的変化や機能異常は細胞骨格の組織化やメカノトランスダクションを乱し、組織発生や細胞恒常性に影響を及ぼし得ます。ヒトでは、ACTG1は感覚系や発達に関わる表現型を示すアクチン関連疾患に関与することが知られており、細胞骨格ダイナミクスや疾患関連の細胞ストレス応答を研究する上で重要な標的です。

ACTG1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ACTG1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ACTG1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ACTG1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はACTG1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ACTG1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のACTG1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるACTG1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびACTG1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるACTG1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。