ACAT-1 Double Nickase Plasmid (h): sc-402300-NIC

ACAT1 kodiert die mitochondriale Acetyl‑CoA‑Acetyltransferase 1 (ACAT‑1), eine Thiolase, die die reversible thiolytische Spaltung von Acetoacetyl‑CoA zu Acetyl‑CoA katalysiert und damit die Verwertung von Ketonkörpern mit der zellulären Verfügbarkeit von Acetyl‑CoA verknüpft. Dieses Enzym ist an der mitochondrialen Fettsäure‑ und verzweigtkettigen Aminosäurekatabolisierung beteiligt und beeinflusst die Energiehomöostase durch die Einbindung in den Citratzyklus (TCA‑Zyklus) sowie durch acetylierungsabhängige metabolische Regulation. Eine veränderte ACAT1‑Aktivität wurde mit angeborenen Störungen des Ketonkörperstoffwechsels und mit breiteren Phänotypen mitochondrialer Dysfunktion in Verbindung gebracht, was ACAT1 für Studien zu metabolischem Stress, Redox‑Gleichgewicht und nährstoffabhängiger Signalgebung relevant macht. ACAT‑1 wird außerdem im Kontext der metabolischen Umprogrammierung von Krebszellen und von mit Neurodegeneration assoziierten bioenergetischen Defekten untersucht, bei denen der Acetyl‑CoA‑Fluss und die mitochondriale Funktion gestört sind.

ACAT-1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ACAT1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ACAT1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ACAT1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.

Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ACAT1-Störung.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.