β-casein CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-419848

Übersicht

Csn2 kodiert das murine β‑Casein, ein wichtiges sezerniertes Phosphoprotein von Mammaryepithelzellen, das zur Assemblierung von Caseinmizellen sowie zum Calcium‑Phosphat‑Transport in der Milch beiträgt. Seine Expression wird während Trächtigkeit und Laktation durch Prolaktin‑ und Glukokortikoid‑Signalwege streng reguliert, insbesondere über JAK2/STAT5 und kooperierende Transkriptionsprogramme, die Differenzierung und sekretorische Funktion der Milchdrüse koordinieren. Da β‑Casein ein kanonischer Marker der laktogenen Differenzierung ist, wird eine Störung von Csn2 häufig genutzt, um die endokrine Kontrolle der epithelialen Reifung, der Proteinsekretion und der Calciumhomöostase zu untersuchen. Eine veränderte Regulation von Casein‑Genen ist zudem hilfreich, um dysregulierte Entwicklungszustände der Milchdrüse zu modellieren und zu beurteilen, wie hormonelle und entzündliche Signale das Transkriptom der Milchproteine umformen.

Das β-casein CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Csn2-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Csn2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Csn2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die β-casein-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Csn2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der β-casein-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Csn2-Exone abzielen, die für die β-casein-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Csn2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom β-casein CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom β-casein CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Csn2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das β-casein HDR-Plasmid (m) und β-casein HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Csn2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Csn2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.