Plasmide CRISPR/Cas9 KO Zap-70 (h): sc-400826

Présentation

ZAP70 code Zap-70, une tyrosine kinase cytoplasmique essentielle à la signalisation proximale du récepteur des lymphocytes T (TCR) en aval de la phosphorylation des chaînes CD3/ζ par LCK. Une fois recrutée sur les ITAM phosphorylés, Zap-70 phosphoryle des protéines adaptatrices telles que LAT et SLP-76, coordonnant l’assemblage de signalosomes qui propagent l’activation de PLCγ1, les flux de Ca²⁺, les cascades MAPK, les programmes transcriptionnels NF-κB/NFAT et le remodelage du cytosquelette. Ces voies contrôlent la sélection des thymocytes, l’activation des lymphocytes T, leur différenciation et leurs fonctions effectrices, reliant l’activité de ZAP70 à l’homéostasie immunitaire. Une expression altérée de ZAP70 ou des dynamiques de signalisation perturbées ont été associées à des phénotypes d’immunodéficience et à une activation lymphocytaire dérégulée observées dans des contextes de maladies auto-immunes et hématologiques.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Zap-70 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène ZAP70 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du ZAP70, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert ZAP70 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Zap-70.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en ZAP70 pour l'étude de la signalisation de Zap-70, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de ZAP70 essentiels à la fonction de Zap-70
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de ZAP70 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Zap-70 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Zap-70 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus ZAP70. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Zap-70 plasmide HDR (h) et le Zap-70 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie ZAP70 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles ZAP70 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.