XIAP CRISPR Activationプラスミド (h): sc-416497-ACT

X連鎖アポトーシス阻害タンパク質（XIAP）は、プログラム細胞死を強力に抑制する因子であり、そのBIRドメインを介してCASP3やCASP7などの実行カスパーゼ、ならびに開始カスパーゼであるCASP9に直接結合して阻害します。カスパーゼ阻害にとどまらず、XIAPはRING型E3リガーゼ活性によってユビキチン依存性シグナル伝達にも関与し、TNF受容体関連経路と交差しつつ、NF-κBに結び付いた生存プログラムを調節します。これらの作用を通じてXIAPは、内因性・外因性のアポトーシス刺激に対する細胞の感受性を左右し、ストレス適応応答の形成にも寄与します。XIAPの発現や機能の破綻は、アポトーシスの閾値や炎症性シグナルの状態の変化と関連づけられており、がん生物学や免疫調節異常の研究において重要な意味を持つことが示されています。

XIAP CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性XIAPの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

XIAP CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における XIAP 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はXIAP転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性XIAPの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のXIAP遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるXIAP依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびXIAP発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるXIAP経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。