Wnt-4 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423717

Descripción general

Wnt4 codifica el ligando de señalización secretado Wnt-4, un regulador clave de la actividad de la vía WNT que modela el desarrollo embrionario y la homeostasis de los tejidos adultos. En el ratón, Wnt-4 influye en decisiones de destino celular, polaridad, migración y diferenciación mediante la activación dependiente del contexto de la señalización canónica de β-catenina y de vías WNT no canónicas. Se asocia estrechamente con la morfogénesis del tracto reproductor y del riñón, con programas osteogénicos y estromales, y con la modulación del microambiente inmunitario a través de redes downstream de remodelación transcripcional y del citoesqueleto. La desregulación de la señalización de Wnt-4 se ha relacionado con fenotipos del desarrollo y con procesos relevantes para la enfermedad, como la fibrosis, la diferenciación aberrante y la reconfiguración de vías asociadas a tumores, utilizados como lecturas mecanísticas en modelos de investigación biomédica.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Wnt-4 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Wnt4 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Wnt4 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Wnt4 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Wnt-4.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Wnt4 para la investigación de la señalización de Wnt-4, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Wnt4 críticos para la función de Wnt-4
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Wnt4 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Wnt-4 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Wnt-4 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Wnt4. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Wnt-4 (m) y el plásmido HDR Wnt-4 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Wnt4 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Wnt4 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.