WDTC1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-411657

Panoramica

WDTC1 (noto anche come fattore regolatore dell’adipogenesi) codifica una proteina contenente ripetizioni WD e domini TPR, implicata nel controllo dell’accumulo lipidico e dei programmi di differenziamento degli adipociti. Le funzioni riportate collegano WDTC1 a meccanismi regolatori dipendenti dall’ubiquitina e a reti trascrizionali che influenzano il bilancio energetico cellulare, con effetti a valle sull’espressione dei geni adipogenici e sull’omeostasi metabolica. Un’alterata attività di WDTC1 è stata associata a fenotipi rilevanti per l’obesità e per una più ampia disregolazione metabolica, rendendolo utile per studi meccanicistici sull’accumulo di grasso e sulla segnalazione responsiva ai nutrienti. Nei modelli cellulari, la perturbazione di WDTC1 può aiutare a indagare le vie che regolano la biologia delle goccioline lipidiche, l’adipogenesi e le risposte allo stress metabolico.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO WDTC1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene WDTC1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del WDTC1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto WDTC1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina WDTC1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di WDTC1 per lo studio della segnalazione di WDTC1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni WDTC1 critici per la funzione di WDTC1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di WDTC1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal WDTC1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal WDTC1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus WDTC1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal WDTC1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR WDTC1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia WDTC1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio WDTC1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.