VPS41 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403666-ACT

VPS41は、Rab GTPaseおよびSNARE機構との相互作用を介してエンドソーム‐リソソーム融合と後期エンドソームの成熟を調整する、HOPSテザリング複合体の中核サブユニットをコードする。リソソームへのカーゴ輸送を支えることで、VPS41はオートファジーフラックス、受容体のダウンレギュレーション、損傷オルガネラのターンオーバーに寄与し、細胞内プロテオスタシスを維持する小胞輸送ネットワークと統合的に機能する。HOPS依存的な輸送の破綻は、リソソーム機能不全、オートファジー障害、シグナル出力の変化と関連し、これらの過程は神経変性やがん細胞生物学でしばしば関与が示されている。そのためヒトVPS41は、エンドリソソーム恒常性、ストレス応答、細胞内輸送を制御する経路において広く研究されている。

VPS41 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性VPS41の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

VPS41 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における VPS41 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はVPS41転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性VPS41の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のVPS41遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるVPS41依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびVPS41発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるVPS41経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。