Plásmido CRISPR de Activación (h) Vav: sc-400606-ACT

El gen humano **VAV1** codifica Vav, un factor de intercambio de nucleótidos de guanina específico del sistema hematopoyético que activa GTPasas de la familia Rho, como **RAC1**, para coordinar la remodelación del citoesqueleto de actina, la adhesión celular y la migración. Vav actúa aguas abajo de la señalización de inmunorreceptores e integrinas, vinculando eventos de fosforilación dependientes de tirosina quinasas con vías que incluyen la señalización del receptor de células T, la activación de **NF-κB/MAPK** y la formación de la sinapsis inmunológica. La señalización desregulada de **VAV1** se asocia con un desarrollo alterado de linfocitos y una activación inmunitaria aberrante, y se ha implicado en neoplasias hematológicas y trastornos relacionados con el sistema inmune. Como nodo de señalización, **VAV1** se estudia ampliamente por sus funciones en los umbrales de activación de linfocitos, la producción de citocinas y el tráfico dependiente del citoesqueleto.

Vav El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de VAV1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Vav El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus VAV1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional VAV1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Vav. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo VAV1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Vav en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Vav en células tumorales con expresión de VAV1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.