Plásmido CRISPR de Activación (h) VASP: sc-401104-ACT

La VASP humana (proteína fosforilada estimulada por vasodilatadores, *vasodilator-stimulated phosphoprotein*) es una proteína reguladora de la actina de la familia Ena/VASP que coordina la elongación de los filamentos de actina, la dinámica de las adhesiones focales y la protrusión de membrana durante el extendido celular y la motilidad. Mediante interacciones con el complejo profilina-actina y con la F-actina, VASP integra señales aguas abajo de quinasas dependientes de AMPc/GMPc y de vías de GTPasas de la familia Rho para ajustar la remodelación del citoesqueleto y la adhesión célula–célula o célula–matriz. El control dependiente de VASP de la función de barrera endotelial, la activación plaquetaria y la migración dirigida vincula este nodo con procesos relevantes para la biología vascular, la inflamación y el comportamiento invasivo celular. La actividad o expresión alterada de VASP se ha estudiado en contextos como la remodelación cardiovascular y la migración asociada al cáncer, lo que la convierte en una herramienta útil para investigar fenotipos impulsados por la actina.

VASP El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de VASP sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

VASP El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus VASP en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional VASP, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de VASP. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo VASP y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de VASP en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía VASP en células tumorales con expresión de VASP silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.