V-ATPase A1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400975

Descripción general

ATP6V0A1 codifica la isoforma a1 de la subunidad “a” del dominio V0 de la ATPasa vacuolar de H\+ (V-ATPasa), una bomba de protones multisubunidad que acidifica endosomas, lisosomas y vesículas secretoras. Al establecer gradientes de pH en el lumen, la V-ATPasa A1 favorece la endocitosis mediada por receptores, la proteólisis lisosomal, el flujo autofagia-lisosoma y el tráfico vesicular, y contribuye a la homeostasis iónica y a la maduración de orgánulos. La alteración de la acidificación dependiente de la V-ATPasa se asocia con defectos en el recambio proteico y en el transporte de membrana, con efectos posteriores sobre las respuestas celulares al estrés y fenotipos vinculados a neurodegeneración y cáncer. Como regulador central de la acidificación de orgánulos, la V-ATPasa A1 se estudia con frecuencia en vías que gobiernan la detección de nutrientes, la señalización de mTORC1 en lisosomas y la dinámica endolisosomal.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO V-ATPase A1 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen ATP6V0A1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del ATP6V0A1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de ATP6V0A1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína V-ATPase A1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en ATP6V0A1 para la investigación de la señalización de V-ATPase A1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de ATP6V0A1 críticos para la función de V-ATPase A1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de ATP6V0A1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido V-ATPase A1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido V-ATPase A1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus ATP6V0A1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR V-ATPase A1 (h) y el plásmido HDR V-ATPase A1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología ATP6V0A1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana ATP6V0A1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.