USP9X Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402285

Descripción general

USP9X codifica una proteasa específica de ubiquitina que regula la estabilidad de las proteínas al eliminar cadenas de ubiquitina de sustratos clave, modulando la proteostasis y la amplitud de las señales. Se ha vinculado al control de la supervivencia celular y de las respuestas al estrés mediante la modulación de vías como la señalización de NF-κB, las redes de respuesta al daño del ADN y procesos asociados al tráfico de membranas. Al influir en el recambio de proteínas reguladoras y de componentes del sistema ubiquitina–proteasoma, USP9X afecta la progresión del ciclo celular, la apoptosis y los programas de diferenciación. La actividad o expresión desregulada de USP9X se ha asociado con una homeostasis de señalización alterada en múltiples contextos relevantes para enfermedades, incluidos la biología del cáncer y fenotipos del neurodesarrollo, lo que la convierte en una diana útil para estudios mecanísticos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO USP9X (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen USP9X en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del USP9X junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de USP9X tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína USP9X.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en USP9X para la investigación de la señalización de USP9X, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de USP9X críticos para la función de USP9X
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de USP9X para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido USP9X CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido USP9X CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus USP9X. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR USP9X (h) y el plásmido HDR USP9X (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología USP9X para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana USP9X definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.