Plasmide CRISPR/Cas9 KO USP11 (h): sc-403368

Présentation

USP11 est une protéase humaine spécifique de l’ubiquitine qui retire l’ubiquitine de substrats protéiques afin de réguler leur stabilité, leur localisation et l’intensité de leur signalisation. Par la déubiquitination, USP11 contribue au contrôle de la protéostasie et module des voies liées aux réponses aux dommages de l’ADN, à la régulation transcriptionnelle et à la progression du cycle cellulaire. Des interactions rapportées situent USP11 au sein de réseaux régulateurs dépendants de l’ubiquitine qui influencent la signalisation de stress et des processus associés à la chromatine. Une activité d’USP11 dérégulée a été associée à des altérations du contrôle de la croissance cellulaire et à des phénotypes affectant le maintien du génome, ce qui appuie sa pertinence en biologie du cancer et dans d’autres troubles impliquant un déséquilibre de la signalisation par l’ubiquitine.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO USP11 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène USP11 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du USP11, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert USP11 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine USP11.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en USP11 pour l'étude de la signalisation de USP11, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de USP11 essentiels à la fonction de USP11
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de USP11 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le USP11 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le USP11 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus USP11. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le USP11 plasmide HDR (h) et le USP11 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie USP11 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles USP11 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.